原料藥質(zhì)量是藥品質(zhì)量控制的關(guān)鍵和源頭。其中，雜質(zhì)的研究與控制事關(guān)藥品的臨床安全性，因而成為原料藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。藥品臨床使用中的不良反應(yīng)除取決于藥品本身的藥理活性外，有時(shí)還與藥品中的雜質(zhì)密切相關(guān)，須嚴(yán)格控制。

從雜質(zhì)來(lái)源分析，幾乎不可能完全除去產(chǎn)品中的雜質(zhì)，也沒(méi)有必要。通過(guò)選擇合適的分析方法，準(zhǔn)確分辨與測(cè)定雜質(zhì)含量，綜合藥學(xué)、毒理學(xué)及臨床研究的結(jié)果，確定雜質(zhì)的合理限度，通過(guò)對(duì)起始原輔料的源頭控制、制備工藝的過(guò)程控制、包裝材料、貯藏條件及有效期的確立等終端控制措施，將雜質(zhì)控制在安全合理的范圍內(nèi)是雜質(zhì)研究的最終目的。

可見(jiàn)，采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒▽?shí)現(xiàn)各類雜質(zhì)的檢出與識(shí)別在雜質(zhì)研究中居于重要的基礎(chǔ)地位。

原料藥雜質(zhì)的分類與基本研究的思路

雜質(zhì)是指在藥品生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存等過(guò)程中產(chǎn)生或引入影響藥物純度的物質(zhì)，在人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(International Conference on Harmonization，ICH)指南的Q3A(R2)中，將藥品雜質(zhì)分為無(wú)機(jī)雜質(zhì)(inorganic impurities)、有機(jī)雜質(zhì)(organic impurities) 和殘留溶劑(residual solvents)3 類。

雜質(zhì)研究與控制的基本思路，是從雜質(zhì)來(lái)源的分析入手，結(jié)合產(chǎn)品的實(shí)際生產(chǎn)工藝、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)等分析可能存在于產(chǎn)品中的中間體、副產(chǎn)物、降解物、反應(yīng)物料等各種潛在雜質(zhì)，通過(guò)雜質(zhì)譜分析全面掌握產(chǎn)品的雜質(zhì)概貌，根據(jù)各類潛在雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別，有針對(duì)性地建立合適的分析方法，以確保各種潛在雜質(zhì)的有效檢出和確認(rèn)。

跟蹤雜質(zhì)譜對(duì)安全性試驗(yàn)或臨床試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響，并結(jié)合相關(guān)指導(dǎo)原則、文獻(xiàn)信息等評(píng)估雜質(zhì)的可接受水平，確立上市產(chǎn)品的雜質(zhì)控制限度。

同時(shí)，通過(guò)雜質(zhì)譜分析明確可能的雜質(zhì)來(lái)源和去向，在制備工藝設(shè)置相應(yīng)雜質(zhì)的針對(duì)性控制措施，并通過(guò)產(chǎn)品包裝和貯藏條件的研究，有效抑制藥品的降解，實(shí)現(xiàn)從雜質(zhì)產(chǎn)生的源頭系統(tǒng)全面地把控藥品雜質(zhì)，從而保證藥品的質(zhì)量及安全性。

也就是說(shuō)，雜質(zhì)研究與控制的內(nèi)容涉及雜質(zhì)分析方法的建立與驗(yàn)證、雜質(zhì)確認(rèn)、雜質(zhì)限度的確定及雜質(zhì)控制諸多方面。

分析方法的建立與驗(yàn)證要結(jié)合雜質(zhì)的不同特點(diǎn)對(duì)分析方法進(jìn)行系統(tǒng)研究和驗(yàn)證，目的是使建立的分析方法適合于相應(yīng)檢測(cè)的要求;

雜質(zhì)確認(rèn)包括特定雜質(zhì)與非特定雜質(zhì)的確認(rèn)、毒性(生物活性)雜質(zhì)與一般雜質(zhì)的確認(rèn)和雜質(zhì)譜分析等，目的是為雜質(zhì)控制及限度確定提供依據(jù);

雜質(zhì)限度的確定是在綜合雜質(zhì)的特性、可接受水平、大生產(chǎn)能達(dá)到的水平基礎(chǔ)上制訂安全合理的限度;

雜質(zhì)的控制是根據(jù)雜質(zhì)研究結(jié)果，通過(guò)原輔料的源頭控制(來(lái)源與質(zhì)量)、制備工藝的過(guò)程控制(關(guān)鍵步驟與工藝參數(shù))、穩(wěn)定性控制(貯藏條件、有效期確定)等措施使雜質(zhì)控制在安全合理范圍。

原料藥雜質(zhì)研究與控制的基本現(xiàn)狀及重點(diǎn)關(guān)注

在原料藥的研究中，雜質(zhì)的檢出及控制至關(guān)重要。原料藥的雜質(zhì)是否能被全面準(zhǔn)確的控制，直接關(guān)系到藥品的臨床安全性、質(zhì)量可控性及產(chǎn)品穩(wěn)定性。

所以，雜質(zhì)研究是原料藥質(zhì)量保證的關(guān)鍵要素之一，同時(shí)也是國(guó)內(nèi)外藥品研發(fā)中重點(diǎn)關(guān)注、不斷深入、快速發(fā)展的領(lǐng)域。隨著人們對(duì)于藥物研發(fā)規(guī)律認(rèn)識(shí)的不斷深入和分析技術(shù)的不斷發(fā)展，雜質(zhì)研究的理念逐漸系統(tǒng)化，監(jiān)管措施也日臻成熟。

同時(shí)，中國(guó)藥典2005 年版起即收載了雜質(zhì)研究的相關(guān)指導(dǎo)原則，并于2005年發(fā)布了我國(guó)首個(gè)《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《殘留溶劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，這對(duì)我國(guó)藥物研發(fā)中的雜質(zhì)研究起到了一定的規(guī)范和指導(dǎo)作用。

隨著對(duì)原料藥雜質(zhì)研究的不斷深入，遺傳毒性雜質(zhì)、金屬雜質(zhì)、抗生素雜質(zhì)等的檢測(cè)及控制成為近幾年原料藥雜質(zhì)研究與控制中的重點(diǎn)，并取得了重要進(jìn)展。

2.1 基因毒性雜質(zhì)

近年來(lái)，基因毒性雜質(zhì)的研究與控制倍受關(guān)注，EMA、FDA 以及ICH 均針對(duì)此類雜質(zhì)制訂了相應(yīng)的指導(dǎo)原則，為遺傳毒性雜質(zhì)的確認(rèn)、研究和控制提供了指導(dǎo)性建議和技術(shù)要求。

尤其ICH 于2014 年7 月15 日正式發(fā)布的Draft Consensus Guideline Assessment and Control of DNA Reactive(Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk(M7)，提供了可用于遺傳毒性雜質(zhì)鑒別、分類、定量分析和控制的可行性框架，系統(tǒng)回答了基因毒性雜質(zhì)研究與控制中一些關(guān)鍵問(wèn)題：

①如何根據(jù)結(jié)構(gòu)活性分析評(píng)估雜質(zhì)潛在的遺傳毒性?

②如何確定雜質(zhì)閾值(TTC)?遺傳毒性雜質(zhì)的可接受水平是多少?

③為什么潛在基因毒性物質(zhì)具有相似的分子結(jié)構(gòu)?

④是否可以采用毒理學(xué)關(guān)注閾值(TTC)來(lái)規(guī)定遺傳毒性雜質(zhì)的水平?

⑤計(jì)算TTC 時(shí)，是否可以將多個(gè)遺傳毒性雜質(zhì)合并計(jì)算?⑥哪些是可接受的特殊情況?日攝入量>TTC 的情況?

該指導(dǎo)原則根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別將基因毒性雜質(zhì)分為5 個(gè)類別：

①已知的致突變、致癌物。即致突變和致癌性數(shù)據(jù)為陽(yáng)性，現(xiàn)有的公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)有ToxNet、NTP、InChem、BG‐Chemie、VITIC 和Leadscope 等。此類雜質(zhì)應(yīng)控制在化合物特定的限度以下。

②已知具有誘變性，但致癌效應(yīng)未知，應(yīng)控制在限度以下。

③含有警示結(jié)構(gòu)，有潛在遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。但與原料藥的結(jié)構(gòu)無(wú)關(guān)，無(wú)致突變性數(shù)據(jù)。此類雜質(zhì)應(yīng)控制在限度以下，或進(jìn)行細(xì)菌致突變性試驗(yàn)，如果細(xì)菌突變Ames 試驗(yàn)陽(yáng)性=2類;細(xì)菌突變Ames 試驗(yàn)陰性=5 類。

④含有警示結(jié)構(gòu)，與原料藥和原料藥結(jié)構(gòu)相似物有關(guān)，但經(jīng)檢驗(yàn)并確認(rèn)無(wú)致突變性。

⑤無(wú)警示結(jié)構(gòu)，或含有警示結(jié)構(gòu)，但有充分的數(shù)據(jù)證實(shí)無(wú)致突變性或致癌性。

此類雜質(zhì)在很低的濃度下即可誘導(dǎo)基因突變并導(dǎo)致染色體的斷裂和重排而具有潛在的致癌性，故研究者對(duì)這類雜質(zhì)的檢出聚焦在于痕量分析手段，重點(diǎn)選擇專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好及準(zhǔn)確度高的分析方法。

目前報(bào)道較多的方法有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用(CE-MS)、液相色譜-核磁共振-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-NMR/MS)等，尤其是LC-MS 的應(yīng)用最為廣泛。

如Feng 等利用LC-MS 法同時(shí)檢測(cè)甲磺酸伊馬替尼中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸丙酯3 個(gè)磺酸酯基因毒性雜質(zhì)，其回收率分別為99.86%、101.7%、103.8%。刁榮蓉等建立LC-MS/MS 檢測(cè)瑞替加濱的遺傳毒性雜質(zhì)，結(jié)果表明該方法可靈敏、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定其雜質(zhì)含量。

2.2 金屬雜質(zhì)

近年提出“金屬雜質(zhì)”的概念正逐漸替代了此前定義不太明確的“重金屬”概念，包括某些過(guò)渡金屬和準(zhǔn)金屬，主要針對(duì)藥物的合成和生產(chǎn)中試劑、催化劑、配位體等的殘留以及與藥物接觸容器引入的金屬雜質(zhì)。

EMA、FDA 及ICH 相繼頒布了金屬雜質(zhì)控制的相關(guān)指導(dǎo)原則，明確提出了金屬雜質(zhì)的分類和限度，ICH 還專門(mén)成立了金屬雜質(zhì)控制專家組，表明對(duì)此類雜質(zhì)的控制已進(jìn)入一個(gè)新的高度。

對(duì)于金屬雜質(zhì)，歐洲藥典(EP7.0)、日本藥典(JP16)、中國(guó)藥典2010 年版均對(duì)重金屬限度檢查法有描述，但此方法類似于20 年前采用干燥失重方法檢測(cè)有機(jī)溶劑殘留量一樣，存在誤差大、專屬性差、靈敏度低的缺陷，更無(wú)法有效控制高風(fēng)險(xiǎn)金屬雜質(zhì)殘留量。

基于上述問(wèn)題，2008 年美國(guó)藥典(USP)發(fā)布了新的重金屬控制專論(GeneralChapter)，明確了多種金屬元素的具體限度，對(duì)于重金屬元素測(cè)定方法中的靈敏度、回收率、校準(zhǔn)和漂移等均給出了相關(guān)規(guī)定，并對(duì)如何根據(jù)元素性質(zhì)制備樣品給出決策樹(shù)。

但對(duì)于一些微量、少見(jiàn)的毒性金屬元素仍沒(méi)有給出控制限度。2014年5 月1 日正式執(zhí)行的美國(guó)藥典新通則<232>和<233>元素雜質(zhì)控制新標(biāo)準(zhǔn)均予以補(bǔ)充。該標(biāo)準(zhǔn)明確要求測(cè)定各元素雜質(zhì)的含量，即由之前的半定量轉(zhuǎn)為定量控制，還規(guī)定了Cd、Pb、As、Hg、Ir、Os、Pd、Pt、Rh、Ru、Cr、Mo、Ni、V、Cu等15 種元素雜質(zhì)的每日允許接觸限值及原料藥、輔料中金屬雜質(zhì)的限量值，并且第1 次明確了催化劑鉑族元素Pt、Pd、Ru、Rh、Os、Ir 等的限度。

對(duì)于大容量注射液(注射劑量為10~100 mL)，新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，必須對(duì)各雜質(zhì)在各組分中的限度分別求和，并建立限度值，制劑中各元素雜質(zhì)限度值(μg·g?1)用公式PDE≥[ΣM(CM×WM)]×DD求和。(M：制劑中各組分名稱;CM：1 g 原料藥或賦形劑組分含有的金屬元素質(zhì)量，單位：μg·g?1;WM：1 個(gè)劑量單位中組分的質(zhì)量;DD：最大日劑量)。

USP 將金屬雜質(zhì)分為2 類：一類為對(duì)人體會(huì)或很可能會(huì)造成毒性，以及造成嚴(yán)重的環(huán)境公害的金屬，應(yīng)嚴(yán)格控制不得出現(xiàn);二類為毒性較一類低但應(yīng)控制的金屬雜質(zhì)，具體分類和限度見(jiàn)表1。

EMA 的指導(dǎo)原則沒(méi)有說(shuō)明USP 中的一類金屬雜質(zhì)，而是將USP 的2 類金屬細(xì)分為3 個(gè)類別：第1 類金屬為具有顯著安全性擔(dān)憂，具有已知或懷疑的致癌性其他顯著毒性，包括1A 亞組：Pt、Pd，1B 亞組：Ir、Rh、Ru、Os，1C 亞組：Mo、Ni、Cr、V;第2 類金屬為具有低的安全性擔(dān)憂，具有潛在的較低毒性，如Cu、Mn 等;第3 類金屬為安全性擔(dān)憂最小，無(wú)明顯毒性，如 Fe、Zn 等，具體見(jiàn)表2。

屬雜質(zhì)的分類和限度控制對(duì)其分析方法提出了嚴(yán)格要求，傳統(tǒng)的重金屬檢查法已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足此類雜質(zhì)控制的要求，ICP-AES(電感耦合等離子體發(fā)射光譜)、ICP-MS(電感耦合等離子體質(zhì)譜)以及GFAAS(石墨爐原子吸收分光光度法)越來(lái)越成為金屬雜質(zhì)研究與控制的常用方法。

與比色法相比較，可將比色法的半定量分析轉(zhuǎn)為定量控制，克服了現(xiàn)行方法的局限性，大大提高了雜質(zhì)檢出的能力。如Chen 等采用該方法檢測(cè)格列齊特中的金屬雜質(zhì)，結(jié)果檢測(cè)限<1 μg·g-1，甚至達(dá)到0.01 μg·g-1水平，而且回收率高達(dá)76.6%~123.0%。

如Zhao 等以Be 為內(nèi)標(biāo)元素校準(zhǔn)基體效應(yīng)及信號(hào)漂移，用ICP-MS 法直接測(cè)定那曲肝素鈣中殘留硼的量，硼的檢出限為0.03 mg·kg-1，線性良好(r=0.999 8)，RSD 為3.5%~5.1%，加標(biāo)回收率在92.0%~96.2%。

2.3 抗生素雜質(zhì)

抗生素一般通過(guò)生物合成(微生物發(fā)酵)、半合成方式得到。微生物發(fā)酵工藝具有明顯不同于全化學(xué)合成工藝的特點(diǎn)，合成過(guò)程不是在反應(yīng)中通過(guò)化學(xué)鍵的斷裂與生成來(lái)實(shí)現(xiàn)，而是在微生物體內(nèi)通過(guò)菌體的初級(jí)或次級(jí)代謝等生命過(guò)程完成。

這種生命過(guò)程是生物細(xì)胞按照其固有的遺傳信息，在所處的培養(yǎng)條件下，進(jìn)行復(fù)雜而細(xì)微的各種動(dòng)態(tài)生化反應(yīng)集合。

這些代謝過(guò)程難以與化學(xué)反應(yīng)一樣實(shí)施精細(xì)、準(zhǔn)確的調(diào)控，只能在研究菌體的發(fā)育、生長(zhǎng)和代謝等生命過(guò)程及各種生物、理化和工程環(huán)境因素對(duì)這些過(guò)程影響的基礎(chǔ)上，對(duì)菌種、發(fā)酵條件和工藝過(guò)程的控制來(lái)把握產(chǎn)品質(zhì)量。

與直接調(diào)控化學(xué)反應(yīng)相比，這種“間接”的過(guò)程控制方式在把握藥品質(zhì)量方面具有相對(duì)較大的風(fēng)險(xiǎn)和難度，導(dǎo)致抗生素雜質(zhì)譜較一般化學(xué)合成藥更加復(fù)雜。

即使是半合成抗生素，起始物為微生物發(fā)酵產(chǎn)物，與一般的化學(xué)合成品相比，也具有純度低、組份復(fù)雜、分子結(jié)構(gòu)中活潑基團(tuán)(如羥基、氨基、醛基等)較多、大多存在構(gòu)型問(wèn)題等特點(diǎn)。

因而導(dǎo)致多種副產(chǎn)物的產(chǎn)生，與純化學(xué)合成產(chǎn)品相比，抗生素產(chǎn)品的雜質(zhì)譜分析更復(fù)雜、更加難以預(yù)測(cè)和控制。

目前，除EMA 2010 年7 月發(fā)布了“Guideline on Setting Specifications for Related Impurities in Antibiotics”外，ICH、FDA 及我國(guó)CFDA 均尚未發(fā)布抗生素藥品雜質(zhì)研究的專門(mén)指導(dǎo)原則。

EMA 指導(dǎo)原則提供了關(guān)于發(fā)酵或半合成的抗生素中有關(guān)雜質(zhì)報(bào)告限度、鑒定限度和確認(rèn)限度的方法，

按照該指導(dǎo)原則，與母體化合物結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的有關(guān)物控制限度為0.50%，其他有關(guān)物質(zhì)的控制限度為0.15%。如果申請(qǐng)人聲明有關(guān)物質(zhì)(未包含在活性物質(zhì)中的化合物)與母體化合物密切相關(guān)，必須采用HPLC/MS 分析法或HPLC/二極管陣列檢測(cè)器或使用分析標(biāo)識(shí)物予以證實(shí);

雜質(zhì)分析時(shí)只要可能，應(yīng)使用外標(biāo)法來(lái)計(jì)算重量比，以便評(píng)估和排除任何可能的質(zhì)量不守恒;

如果使用面積歸一法，相關(guān)成分和有關(guān)物質(zhì)應(yīng)在檢測(cè)器中產(chǎn)生相似反應(yīng)，否則應(yīng)使用響應(yīng)因子進(jìn)行校正。該指導(dǎo)原則所述雜質(zhì)不包括發(fā)酵工藝中產(chǎn)生的殘?jiān)?，如?lái)自培養(yǎng)基、產(chǎn)物母體和微生物發(fā)生器的殘?jiān)取?/p>

Liu 等通過(guò)對(duì)比中國(guó)藥典、美國(guó)藥典和歐洲藥典中對(duì)頭孢丙烯原料雜質(zhì)的控制標(biāo)準(zhǔn)與方法。發(fā)現(xiàn)美國(guó)藥典未對(duì)頭孢丙烯有關(guān)物質(zhì)檢查做出要求，但在含量測(cè)定中規(guī)定了頭孢丙烯(Z)和(E)異構(gòu)體的控制標(biāo)準(zhǔn);

中國(guó)藥典除規(guī)定頭孢丙烯(Z)和(E)異構(gòu)體外，還規(guī)定了頭孢羥氨芐雜質(zhì)限量和其他雜質(zhì)總限量;歐洲藥典除規(guī)定頭孢丙烯(Z)和(E)限量外，還規(guī)定了另外14 種雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間和限量標(biāo)準(zhǔn)，并給出了它們的結(jié)構(gòu)式。

可見(jiàn)，歐洲藥典對(duì)頭孢丙烯質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)最為嚴(yán)格和具體。

雜質(zhì)分析方法的新進(jìn)展

分析方法是獲取雜質(zhì)信息的手段，直接關(guān)系到對(duì)藥物雜質(zhì)信息把握的準(zhǔn)確性和全面性。因此，雜質(zhì)研究的首要問(wèn)題是選擇合適的分析方法。

對(duì)于原料中雜質(zhì)的檢測(cè)，應(yīng)根據(jù)藥物及雜質(zhì)的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)、控制要求選擇適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)。雜質(zhì)的微量性和多樣性決定了具有分離分析特點(diǎn)的色譜法成為雜質(zhì)研究的常用方法， 主要有HPLC、GC、GPC 和CE 等。

但是，單一方法均存在一定的局限性，所以對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)運(yùn)用不同原理的分析方法相互補(bǔ)充與驗(yàn)證。

目前，國(guó)際前沿的雜質(zhì)研究與分析不斷吸納當(dāng)今分析科學(xué)新成就和藥物研發(fā)規(guī)律新認(rèn)識(shí)，色譜儀器越來(lái)越專業(yè)化(凝膠色譜、離子色譜、逆流分溶色譜等相繼用于有關(guān)物質(zhì)檢測(cè))，色譜與光譜聯(lián)用技術(shù)越來(lái)越成熟(HPLC-UV，HPLC-MS，HPLC-NMR;GC-MS，GC-IR 等聯(lián)用儀器正在普及應(yīng)用中)，各類數(shù)據(jù)庫(kù)越來(lái)越豐富，聯(lián)機(jī)智能化解析系統(tǒng)越來(lái)越普及，為雜質(zhì)研究提供了更為完善的利器。

新型色譜填料和不同類型檢測(cè)器不斷出現(xiàn)在藥品的雜質(zhì)控制中，USP 自第26 版開(kāi)始，每版都有新類型的色譜柱增加，USP 第31 版即已增加至63 種固定相填料，使得采用多樣化的色譜條件和檢測(cè)手段(HPLC-UV/ECD/ELSD/RID)有效控制不同類型雜質(zhì)成為可能。

雜質(zhì)檢測(cè)逐步呈現(xiàn)出全面檢出(梯度洗脫，多檢測(cè)手段互補(bǔ)、明確靈敏度要求)、有效分離(規(guī)定最難分離物質(zhì)對(duì)峰間的分離度)、目標(biāo)明確(特定雜質(zhì)、非特定雜質(zhì))、準(zhǔn)確定量(外標(biāo)、校正因子、歸一法相結(jié)合)的趨勢(shì)。如Shen 等利用HPLC-DAD/MS對(duì)辛伐他汀中潛在的7 個(gè)已知雜質(zhì)A、B、C、D、E、F、G 進(jìn)行了歸屬分析，彌補(bǔ)了高效液相法保留時(shí)間定位的不足。

LC-MS 聯(lián)用技術(shù)將LC 的高分離能力和MS的高靈敏度、高專屬性融于一體，主要分為高分辨率質(zhì)譜(HRMS)、多級(jí)質(zhì)譜(MSn)、氫/氘轉(zhuǎn)換質(zhì)譜(HDE-MS)3 類。

在原料藥的雜質(zhì)譜分析中，可鑒別已知雜質(zhì)和推導(dǎo)未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

如Li 等[30]采用超高效液相- 三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/MS)研究辛伐他汀的雜質(zhì)譜，推出了含量≥0.05%的12 個(gè)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

楊麗珍等運(yùn)用高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法分析克拉屈濱的主要雜質(zhì)及來(lái)源。

HaRigaya 等利用HPLC-ICP-MS 檢測(cè)安替比林中殘留苯肼雜質(zhì)。LCMS聯(lián)用技術(shù)還被廣泛用于檢測(cè)原料藥儲(chǔ)藏過(guò)程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，為藥物的儲(chǔ)藏、運(yùn)輸及整個(gè)過(guò)程中的存放條件提供理論依據(jù)。

總之，LC-MS聯(lián)用技術(shù)結(jié)合雜質(zhì)譜的“指紋”特征，可以快速評(píng)估合成工藝，并對(duì)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行歸屬，對(duì)原料藥雜質(zhì)的控制具有指導(dǎo)作用。

GC-MS 聯(lián)用技術(shù)具有高選擇性、高靈敏度及含有豐富的結(jié)構(gòu)信息等優(yōu)點(diǎn)，特別適合易揮發(fā)的多組分混合物中未知組分的定性、定量分析，對(duì)有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)和殘留溶劑的測(cè)定是不可或缺的工具。

如Zhang 等利用GC-MS 對(duì)磺酸酯類物質(zhì)的痕量分析，有效的控制了雜質(zhì)的限度。Razbor?ek等考察了反式迷迭香酸在光照、高溫、不同溶劑和濕度條件下的穩(wěn)定性，并利用GC-MS 分析反式迷迭香酸的降解產(chǎn)物，通過(guò)MS 碎片離子來(lái)推導(dǎo)降解產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示其唯一降解產(chǎn)物為順式迷迭香酸。

LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)具有專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，常被運(yùn)用于未知雜質(zhì)的研究。

如Pan等使用LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)鑒別TCH346 中的降解雜質(zhì)。Murakami 和Provera 等將LC-NMR、LC-MS 運(yùn)用于NK1 拮抗劑GW597599 原料藥中雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒定。

Novak 等利用停留模式的LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)快速鑒定新型抗真菌藥Icofungipen 的未知雜質(zhì)，并合成了該雜質(zhì)。

CE-MS 聯(lián)用技術(shù)適合用于分析在溶劑中易解離的強(qiáng)極性化合物。有一些研究者采用具有較高的檢測(cè)靈敏度且操作簡(jiǎn)單的在線推掃富集技術(shù)補(bǔ)充其不足。如Zhao 和Du 等利用膠束毛細(xì)管電泳在線推掃富集技術(shù)測(cè)定了乳酸環(huán)丙沙星原料中的痕量雜質(zhì)，并解決了膠束毛細(xì)管電泳在測(cè)定過(guò)程中重現(xiàn)性差的問(wèn)題。

結(jié)語(yǔ)

藥品中的雜質(zhì)是否能被全面準(zhǔn)確地控制，直接關(guān)系到藥品的質(zhì)量可控與安全性，原料藥的雜質(zhì)研究與控制是保證藥品安全性和質(zhì)量可控性的前提和關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是藥物一致性評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。

根據(jù)掌握的雜質(zhì)譜概況，依據(jù)各類潛在雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別、產(chǎn)生的可能性高低制定進(jìn)一步的研究控制策略。

雜質(zhì)的控制一般應(yīng)包括每個(gè)明確的已知雜質(zhì)、每個(gè)明確的未知特定雜質(zhì)、任何非特定雜質(zhì)(不超過(guò)鑒定限度)以及總雜質(zhì)，關(guān)注是否進(jìn)行了高毒性雜質(zhì)與一般毒性雜質(zhì)、毒性雜質(zhì)與一般雜質(zhì)、新增雜質(zhì)與超量雜質(zhì)、特定雜質(zhì)與非特定雜質(zhì)、單個(gè)雜質(zhì)與總雜質(zhì)的研究與控制。

當(dāng)試驗(yàn)表明現(xiàn)有技術(shù)的確無(wú)法鑒定某個(gè)雜質(zhì)時(shí)，至少要提供此雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的充分證據(jù)來(lái)表明它可歸屬為母體化合物或某側(cè)鏈等有關(guān)物質(zhì)，將其作為明確的未知雜質(zhì)使用適當(dāng)?shù)姆治鰳?biāo)識(shí)手段進(jìn)行識(shí)別和控制。

遺傳毒性的控制是目前雜質(zhì)研究中的一個(gè)新課題，也是藥品研發(fā)中風(fēng)險(xiǎn)控制的關(guān)鍵把手，研發(fā)中需要根據(jù)有機(jī)化學(xué)反應(yīng)機(jī)制分析原料藥合成、純化、制劑生產(chǎn)和貯存過(guò)程中很有可能產(chǎn)生的實(shí)際的和潛在的遺傳毒性雜質(zhì)，依據(jù)相關(guān)毒性物質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)甄別、評(píng)估可能具有基因毒性的雜質(zhì)或具有基因毒性結(jié)構(gòu)單元的雜質(zhì)，參照國(guó)內(nèi)外相關(guān)技術(shù)文件的研究思路與策略，對(duì)此類雜質(zhì)進(jìn)行針對(duì)性的確認(rèn)、檢出和控制，充分保證產(chǎn)品的安全性。